É autorizada a reprodução integral desta dissertação apenas para efeitos de investigação mediante declaração escrita do interessado, que a tal se compromete. iii O presente trabalho não seria possível sem a ajuda e o apoio de determinadas...
moreÉ autorizada a reprodução integral desta dissertação apenas para efeitos de investigação mediante declaração escrita do interessado, que a tal se compromete. iii O presente trabalho não seria possível sem a ajuda e o apoio de determinadas pessoas que demonstraram o seu apoio e carinho incondicional. Tentando não esquecer ninguém, quero agradecer: Em primeiro lugar, à Fundação Astrazeneca, que financiou este projecto. À Professora Doutora Maria Beatriz Prior Pinto Oliveira, coordenadora do Mestrado em Controlo de Qualidade, pela sua preocupação, atenção e apoio prestados, pela rápida resposta e bons conselhos sempre que solicitada, aproveitando para felicitá-la pela excelente coordenação deste mestrado. Ao Professor Doutor Rui Medeiros, meu orientador neste trabalho, pela simpatia e prontidão com que me recebeu, pelo apoio, pela ginástica temporal para me incluir na sua agenda, por si só cheia, pela paciência e entendimento, e principalmente pela orientação neste projecto inesperado. À Professora Doutora Maria de São José Nascimento, minha co-orientadora que prontamente aceitou co-orientar este projecto, pelas palavras reconfortantes de força e disponibilidade, que sempre me foi transmitindo nos últimos anos e pelo seu optimismo contagiante, que se revelou muito útil nos últimos meses. À Doutora Albina Marinho, do laboratório de Virologia do IPO-Porto, pela simpatia e atenção prestada e pela partilha de conhecimentos que em muito enriqueceram este trabalho. A todos os meus colegas e recentes amigos do laboratório de Oncologia Molecular do IPO--Porto, pela simpatia com que me receberam e se deixaram observar nas suas rotinas diárias. A todos os meus antigos colegas e amigos do departamento de Química Orgânica da Faculdade de Farmácia da Universidade do Porto, especialmente à Professora Doutora Maria José Gonzalez e ao Carlos, pela grande amizade, alegria e apoio que sempre me demonstraram. A todos os meus familiares e amigos, pela presença e apoio constante. À Cátia, amiga e antiga companheira de laboratório e mestrado, pela amizade incondicional. Aos meus pais, pelo enorme carinho e apoio com que acompanharam as diversas fases deste mestrado, desculpando todos os pequenos momentos de má disposição e falta de disponibilidade. Ao Hélder, meu irmão, a pessoa que mais acredita em mim, por todas as horas infindáveis de conversa e carinho. Ao Pedro, que me acompanhou desde sempre neste mestrado, pela confiança, incentivo e carinho nas horas certas. Esta dissertação pretende apresentar uma proposta de avaliação interna da qualidade das técnicas de PCR-RFLP e Real-Time PCR, utilizadas diariamente no laboratório de Oncologia Molecular do IPO-Porto, com fins de diagnóstico e investigação epidemiológica e farmacogenómica. Este trabalho baseou-se apenas na sua utilização qualitativa em projectos de investigação. O controlo e a garantia de qualidade têm um papel vital hoje em dia, ajudando a garantir a fiabilidade de resultados e produtos. Os critérios de qualidade tornaram-se essenciais para assegurar a correcta utilização de tecnologias genéticas que se desenvolveram nas últimas décadas, como é o caso da amplificação dos ácidos nucleicos. Desde a sua descoberta, a amplificação dos ácidos nucleicos in vitro, através da técnica de PCR, tornou-se uma ferramenta muito poderosa em laboratórios de diagnóstico. No entanto, uma das desvantagens apontadas tem sido a falta de requisitos e regulamentos padronizados para esta técnica, assim como a dificuldade de controlar todas as variáveis intervenientes, podendo comprometer a qualidade dos resultados. Sendo assim, e face à nova tendência universal de garantia de qualidade, é necessário implementar protocolos de controlo e sistemas de gestão de qualidade. O HACCP é uma metodologia preventiva que assenta numa abordagem científica e sistemática de identificação e avaliação de perigos específicos em todas as etapas da produção. Apesar do uso do HACCP não se ter ainda expandido ao laboratório de técnicas genéticas, a base deste sistema pode ser adaptada a diferentes sectores, com alta probabilidade de sucesso. Através de uma cuidada observação do laboratório de Oncologia Molecular e seus colaboradores e utilizando as bases do sistema de gestão de qualidade HACCP, foram elaborados os fluxogramas das técnicas de PCR-RFLP e Real-Time PCR, e preenchidas tabelas de identificação de perigos, pontos críticos de controlo, medidas de controlo e correctivas, reunindo todos os cuidados e acções a realizar durante a técnica e na resolução de problemas. A partir daqui, foram adaptados critérios de avaliação dos vários sectores do laboratório, utilizados na observação diária e que poderão ser implementados futuramente como medidas de avaliação interna do local, sua organização e colaboradores. Com a utilização dos fundamentos do HACCP, os critérios e a observação, concluiu-se que os principais requisitos de trabalho eram, em geral, cumpridos, mas que faltava um protocolo que avaliasse internamente a qualidade dos vários passos, para além dos resultados. Tendo em conta os pontos críticos identificados e a necessária adaptação ao local, elaborou-se um plano de controlo de qualidade interno, a experimentar, melhorar e implementar num futuro próximo.